空柱的准备

准备步骤：空柱中筛网需要定期用 0.5 M 的 NaOH 超声清洗，并且用 20 % 乙醇排除气泡，内部接一定要确保拧紧，各个部件组装完成后用水检查气密性。将空柱用柱夹固定，连接到层析仪中，保证水平和垂直，对于凝胶过滤填料的装填，需要用水平仪检查。
 

填料匀浆的准备

反复使用的填料：需要对填料进行再生，如果填料再生后仍然结块明显，搅拌后部分为絮状或者有色素沉着，建议选用新填料。

新填料：填料储存液通常为 20 % 乙醇，装柱溶液根据填料的不同而不同，可能是水溶液，盐溶液或者是有机溶液等。将上述已经交换到装柱溶液中的填料进行匀浆，可以选用烧杯，玻棒轻搅即可，切不可用搅拌子，防止填料颗粒破碎。匀浆浓度在 50 %-70 % 之间，太稀或者太浓都会影响装填的均一性。所需填料匀浆的体积计算公式如下图：



倒胶及压胶

a.用注射器将空柱下端注入 2 cm 左右高度的装柱溶液。

b.然后将填料匀浆用玻璃棒引流，倒入空柱中，过程快速，温和，防止有气泡产生。

c.用注射器补充装柱溶液至空柱顶端，使液面微微凸起于空柱上端，上端柱头筛网脱气后倾斜的插入空柱中，旋紧外层接头及柱头，设置柱前压 (保护空柱) 及 Delta 压 (保护填料) 后启动层析设备开始压胶。可以采用恒压或者恒流的方式进行压胶（装柱推荐流速或者压力请参见填料说明书），两者区别如下图所示：

d.待胶面不再下降后，标记胶面位置，暂停纯化仪，拧松柱头，下降至胶面下方3 mm左右，重新拧紧即可。
 

柱效检测

检测方法：

柱效是检测装柱质量的指标，也是目标分子纯化成败的关键因素。柱效由理论塔板高度（HETP）及对称因子（As）决定。柱效的测定可以用 1 % 的丙酮或者 2 M NaCl 来进行测定，分别用 UV 280 及电导来进行检测，上样量为柱体积的 1 % - 2 %，柱效的测定中流速请参见填料说明书。

结果评价：

理论塔板高度（HETP）：理想情况为 1-2 个填料粒径大小，通常 2-4 个填料粒径大小是非常好的情况，3-5 个填料粒径大小也是可以接受的，当然也取决于固有生产中 SOP 的要求。

对称因子（As）：理想情况为 1，但是 0.8-1.5 也是在可接受的范围内。

流出峰拖尾：表明填料没有压实。

流出峰前倾：表明填料压的太紧。

流出峰多峰：表明柱内填料密度不均。